انٹرا سیلولر پروٹین نکالنے میں الٹراسونک ہوموگنائزر کا اطلاق

I. الٹراسونک ہوموگینائزر کا استعمال کرتے ہوئے خلیوں سے انٹرا سیلولر پروٹین نکالنے کا اصول

مزید برآں ، الٹراساؤنڈ کے ذریعہ پیدا ہونے والی اعلی - تعدد مکینیکل کمپن سیل معطلی میں ذرات کی پرتشدد حرکت کا سبب بن سکتی ہے۔ ذرات کے مابین تصادم اور رگڑ خلیوں میں خلل کے اثر کو مزید بڑھاتا ہے۔ اس کے ساتھ ہی ، الٹراساؤنڈ نکالنے کے درمیانے اور انٹرا سیلولر اجزاء کے مابین مکمل رابطے کو فروغ دے سکتا ہے ، جس سے پروٹین کی تحلیل اور رہائی کی شرح کو تیز کیا جاسکتا ہے ، اور اس طرح نکالنے کی کارکردگی کو بہتر بنایا جاسکتا ہے۔ یہ واضح رہے کہ سیل میں خلل کے دوران ، الٹراساؤنڈ مقامی درجہ حرارت میں اضافے یا ضرورت سے زیادہ مکینیکل قوت جیسے عوامل کی وجہ سے پروٹین کی مقامی ڈھانچے کو متاثر کرسکتا ہے۔ لہذا ، پروٹین کی سرگرمی کو یقینی بنانے کے لئے الٹراساؤنڈ پیرامیٹرز کو معقول حد تک کنٹرول کرنا ضروری ہے۔

ii. انٹرا سیلولر پروٹین نکالنے میں الٹراسونک ہوموجنجیرس کے فوائد

(i) اعلی خلل کی کارکردگی اور تیز رفتار نکالنے کی شرح

روایتی خلیوں میں خلل ڈالنے کے طریقوں (جیسے بار بار منجمد - پگھلنے والے چکروں ، پیسنے ، اور اعلی - پریشر ہوموجنائزیشن) کے مقابلے میں ، الٹراسونک ہوموگینائزر نمایاں طور پر اعلی رکاوٹ کی کارکردگی پیش کرتے ہیں۔ الٹراساؤنڈ کے ذریعہ پیدا ہونے والا کاویٹیشن اثر تھوڑی ہی دیر میں خلیوں کی ایک بڑی تعداد پر کام کرسکتا ہے ، جس سے خلیوں کی ساخت میں تیزی سے خلل پڑتا ہے اور انٹرا سیلولر پروٹین کی تیزی سے رہائی ہوتی ہے۔ مطالعات سے پتہ چلتا ہے کہ اسی تجرباتی حالات کے تحت ، الٹراسونک ہوموگینیزرز کا استعمال کرتے ہوئے انٹرا سیلولر پروٹین کے لئے نکالنے کا وقت عام طور پر صرف 1/3 سے 1/2 روایتی طریقوں سے ہوتا ہے ، جس سے نکالنے کی کارکردگی کو بہت بہتر بنایا جاتا ہے اور اسے بڑے - پیمانے کے نمونے کی پروسیسنگ کے لئے موزوں بنایا جاتا ہے۔

(ii) آسان آپریشن اور آسان کنٹرول

الٹراسونک ہوموگنائزر کا آپریشن نسبتا simple آسان ہے۔ سیل معطلی کو الٹراسونک تحقیقات کے تحت صرف رکھیں اور سیل میں خلل اور پروٹین نکالنے کے ل activers الٹراسونک پاور ، الٹراسونک ٹائم ، اور پلس فریکوینسی جیسے پیرامیٹرز کو ایڈجسٹ کریں۔ سامان انتہائی خود کار ہے ، جس میں کسی پیچیدہ دستی آپریشن کی ضرورت نہیں ہے ، اور پیرامیٹرز کو سیل کی مختلف اقسام ، نمونے کی حجم ، اور نکالنے کی ضروریات کے مطابق واضح طور پر ایڈجسٹ کیا جاسکتا ہے ، جس سے نکالنے کے عمل کی استحکام اور تکرار کی صلاحیت کو یقینی بنایا جاسکتا ہے۔ مزید برآں ، الٹراسونک ہوموگینائزر نسبتا small چھوٹے سائز میں ہوتے ہیں ، تھوڑی سی جگہ پر قابض ہوتے ہیں ، اور دیکھ بھال کے کم اخراجات ہوتے ہیں ، جس سے وہ لیبارٹریوں اور صنعتی پیداوار جیسے مختلف منظرناموں کے لئے موزوں ہیں۔

(iii) پروٹین کی سرگرمی پر کم سے کم اثر

الٹراسونک پیرامیٹرز کے معقول کنٹرول کی بنیاد کے تحت ، انٹرا سیلولر پروٹین کی سرگرمی پر الٹراسونک ہوموجنجیزرز کے اثرات دیگر رکاوٹ کے طریقوں سے کہیں کم ہیں۔ روایتی اعلی - دباؤ ہوموجنائزیشن اور پیسنے کے طریقے اکثر زیادہ میکانکی قوت اور ضرورت سے زیادہ اعلی مقامی درجہ حرارت کی وجہ سے پروٹین کی تردید اور غیر فعال ہونے کا باعث بنتے ہیں۔ الٹراسونک ہوموگنیزر ، تاہم ، پلسڈ الٹراساؤنڈ (یعنی ، الٹراساؤنڈ اور وقفے وقفے سے عمل کے درمیان ردوبدل) اور نکالنے کے نظام کے درجہ حرارت (جیسے آئس غسل کولنگ) کو کنٹرول کرکے پروٹینوں پر الٹراسونیکیشن کے دوران پیدا ہونے والی گرمی کے اثرات کو مؤثر طریقے سے کم کرسکتے ہیں۔ دریں اثنا ، مختصر الٹراسونک علاج کا وقت نکالنے کے دوران پروٹین کی نمائش کے وقت کو کم کرتا ہے ، جس سے ان کی قدرتی ڈھانچے اور بائیو ایکٹیویٹی کو مزید محفوظ کیا جاتا ہے۔

(iv) وسیع لاگو

الٹراسونک ہوموگینزر مختلف سیل اقسام سے انٹرا سیلولر پروٹین نکالنے کے لئے موزوں ہیں ، بشمول بیکٹیریا ، کوکی ، خمیر ، پودوں کے خلیات اور جانوروں کے خلیوں۔ سیل کی مختلف اقسام میں مختلف سیل جھلی اور سیل دیوار کے ڈھانچے ہوتے ہیں ، جس کے نتیجے میں سیل میں خلل میں مختلف ڈگری مشکل ہوتی ہے۔ الٹراسونک ہوموگینائزر الٹراسونک پیرامیٹرز (جیسے طاقت میں اضافہ یا وقت میں توسیع) کو ایڈجسٹ کرکے مختلف خلیوں کی رکاوٹ کی ضروریات کو اپنا سکتے ہیں۔ مزید برآں ، یہ سامان لیبارٹری میں نہ صرف چھوٹے - پیمانے کے نمونے نکالنے کے لئے موزوں ہے بلکہ اس کا اطلاق الٹراسونک تحقیقات کے سائز اور پروسیسنگ کی صلاحیت میں اضافہ کرکے صنعتی پیداوار میں بڑے - پیمانے پر انٹرا سیلولر پروٹین نکالنے پر بھی لگایا جاسکتا ہے۔

الٹراسونک ہوموگینائزر ، ان کے اعلی رکاوٹ کی کارکردگی ، آپریشن میں آسانی ، پروٹین کی سرگرمی پر کم سے کم اثر ، اور وسیع اطلاق کے فوائد کے ساتھ ، انٹرا سیلولر پروٹینوں کو نکالنے میں ایک اہم ذریعہ بن چکے ہیں۔ وہ کاویٹیشن اور مکینیکل کمپن کے ذریعے خلیوں میں خلل حاصل کرتے ہیں ، جس سے انٹرا سیلولر پروٹین کی تیز اور موثر رہائی کو قابل بناتا ہے۔ عملی ایپلی کیشنز میں ، زیادہ سے زیادہ نکالنے کے نتائج حاصل کرنے کے لئے الٹراسونک پیرامیٹرز ، سیل معطلی کی خصوصیات ، اور درجہ حرارت جیسے اثر انداز کرنے والے عوامل کو عقلی طور پر کنٹرول کرنا ضروری ہے۔ الٹراسونک ٹکنالوجی میں بائیوٹیکنالوجی اور جاری جدت کی مسلسل ترقی کے ساتھ ، انٹرا سیلولر پروٹین نکالنے کے شعبے میں الٹراسونک ہوموجینائزرز کا اطلاق اور بھی وسیع ہوجائے گا ، جو متعلقہ شعبوں میں تحقیق اور صنعتی ترقی کے لئے مضبوط مدد فراہم کرے گا۔

الٹراسونک ہوموگینائزرز بنیادی طور پر کاویٹیشن اثر ، مکینیکل کمپن ، اور قینچ فورس کا استعمال کرتے ہیں جب الٹراساؤنڈ سیل میں خلل کو حاصل کرنے کے لئے مائع میڈیم میں پھیلتا ہے ، اور اس طرح انٹرا سیلولر پروٹین جاری کرتا ہے۔ جب الٹراساؤنڈ سیل معطلی پر کام کرتا ہے تو ، مائع میڈیم میں چھوٹی چھوٹی بلبلوں کی ایک بڑی تعداد مستقل طور پر تیار کی جاتی ہے۔ یہ بلبلے تیزی سے پھیلتے ہیں اور الٹراساؤنڈ کے وقتا فوقتا دباؤ کے تحت معاہدہ کرتے ہیں ، آخر کار پھٹ جاتے ہیں۔ بلبلوں کا پھٹنا انتہائی مضبوط جھٹکا لہروں اور مائکروجیٹس کو پیدا کرتا ہے ، جس میں دباؤ ہزاروں ماحولوں تک پہنچ جاتا ہے۔ یہ طاقتور مکینیکل قوت سیل جھلیوں اور خلیوں کی دیواروں کی ساختی سالمیت کو مؤثر طریقے سے خلل ڈال سکتی ہے ، جس سے انٹرا سیلولر بائومولیکولس جیسے پروٹین اور نیوکلیک ایسڈ کو نکالنے کے ذریعہ جاری کیا جاسکتا ہے۔